作业帮用潮霉素平板筛选拟南芥浓度一般是多少?直接将种子灭菌后种在平板上筛选可以吗? 我用了20-60mg/l的潮霉素进行梯度实验,都没有长... 还需要在无抗的MS上长成幼苗再移栽到含有抗性的上面去
来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/05/08 19:17:49
用潮霉素平板筛选拟南芥浓度一般是多少?直接将种子灭菌后种在平板上筛选可以吗? 我用了20-60mg/l的潮霉素进行梯度实验,都没有长... 还需要在无抗的MS上长成幼苗再移栽到含有抗性的上面去
用潮霉素平板筛选拟南芥浓度一般是多少?
直接将种子灭菌后种在平板上筛选可以吗?
我用了20-60mg/l的潮霉素进行梯度实验,都没有长...
还需要在无抗的MS上长成幼苗再移栽到含有抗性的上面去筛选吗?
用潮霉素平板筛选拟南芥浓度一般是多少?直接将种子灭菌后种在平板上筛选可以吗? 我用了20-60mg/l的潮霉素进行梯度实验,都没有长... 还需要在无抗的MS上长成幼苗再移栽到含有抗性的上面去
没有做过这个,不过找到一些资料,希望对你有帮助,请参考：
一：
1.拟南芥幼苗的培养
将拟南芥种子在无菌水里浸泡30 min 后,加入70 %乙醇放置30 s ,无菌水洗3 次,加入10 %次氯酸钠振荡5 min 后,无菌水洗5～6 次. 然后将拟南芥种子重悬于无菌水,用l mL 移液器吸取拟南芥种子播种于MS 固体培养基上,在22/ 18 ℃,16/ 8 h 光周期条件下培养.
2.潮霉素对拟南芥幼苗生长的影响
将拟南芥种子播种于MS 固体培养基(分别含0μg/ mL ,10μg/ mL ,20μg/ L ,30μg/ mL 或50μg/ mL潮霉素) 上,在22/ 18 ℃,16/ 8 h 光周期条件下进行培养,每个处理设3 个重复. 观察不同时间拟南芥幼苗的生长情况.
3.石蜡切片分析
将拟南芥种子播种于MS 固体培养基(分别含0μg/ mL ,30μg/ mL 潮霉素) 上,在22/ 18 ℃,16/ 8 h 光周期条件下培养,每个处理设3 个重复. 另外,将生长于MS 固体培养基(含30μg/ mL 潮霉素) 上7 d 的拟南芥幼苗转移到MS 培养基上培养,以研究拟南芥幼苗叶生长的情况.分别取生长于MS 培养基和含30μg/ mL 潮霉素的MS 培养基上的拟南芥幼苗茎尖部位(每次取3 个样本,重复3 次) ,用50 %FAA 溶液固定,梯度酒精脱水,然后转入二甲苯中并浸蜡,石蜡包埋后,L KB 超薄切片机切片,切片经番红- 顾绿双重染色后,在Olymp us 光学显微镜下观察并拍照.
二：
1.种子前处理
将拟南芥种子在无菌水里浸泡30min 后, 加入70% 乙醇放置30 s, 倒掉乙醇, 无菌水洗3 次, 加入10%次氯酸钠振荡5min 后, 用无菌水洗5~ 6 次.然后将拟南芥种子重悬于无菌水待播.
2.潮霉素抗性浓度的筛选
将拟南芥种子播于分别含有0g/ mL、10g/ mL、20g / mL、30g/mL 和50g/mL 潮霉素的MS 固体培养基上, 在22/ 18 ℃、16/ 8h 光周期条件下进行培养, 重复3 次.
3. 潮霉素对拟南芥幼苗叶和根生长的影响
将拟南芥种子分别播种于MS 固体培养基和含有30 g/ mL 潮霉素的MS 固体培养基上, 在22/18 ℃ 、16/ 8 h 光周期条件下进行培养, 重复3 次.观察不同时期拟南芥幼苗叶和根生长的变化; 另外, 将加入30g/ mL 潮霉素的MS 固体培养基上生长7 d的拟南芥幼苗转移到MS 固体培养基上继续培养,观察拟南芥幼苗叶和根的生长情况.